HIV-1 coreceptor tropisme bepaling

HIV-1 coreceptor tropisme bepaling wordt uitgevoerd wanneer de start van een CCR5 antagonist, zoals Maraviroc, wordt overwogen. Het uitvoeren van de test kan ook worden overwogen bij mensen die leven met HIV en die op ART met Maraviroc staan, die een virologisch falen vertonen en waarbij men wil uitsluiten dat een verandering van HIV coreceptor de oorzaak zou kunnen zijn van het virologisch falen. De genotypische tropisme test wordt als volwaardig alternatief beschouwd voor de fenotypische test. Standaard wordt deze test uitgevoerd op viraal RNA. In het geval dat de hoeveelheid viraal RNA ontoereikend is, kan de test ook worden uitgevoerd op het proviraal DNA. HIV-1 coreceptor tropisme bepaling zit niet in onze Belac accreditatiescope en wordt dus buiten accreditatie uitgevoerd.

Specificaties van de testen

  • Specificaties van de test
Voor infectie van een gastheercel moet HIV zich kunnen hechten aan een CD4 cel (de receptor) en aan een coreceptor (CCR5 of CXCR4). Alleen virussen die de CCR5 receptor gebruiken zijn gevoelig voor maraviroc (een CCR5 inhibitor). Bepalen van het HIV-1 coreceptor gebruik is dus noodzakelijk bij patiënten waarbij het opstarten van maraviroc overwogen wordt, maar kan ook aangewezen zijn bij patiënten met indicaties voor therapiefalen onder een regime met maraviroc.
Meer info

Via  genotypische coreceptor tropisme bepaling wordt de affiniteit van HIV voor de coreceptoren afgeleid van de nucleotide-sequentie van V3, een regio in het enveloppe gen. Het sequeneren van deze V3 regio gebeurt steeds in drievoud.
Voor het voorspellen van het coreceptor gebruik wordt vervolgens een algoritme gebruikt dat ontwikkeld werd in het Max Planck Institute (Geno-2-Pheno). De voorspelling wordt uitgedrukt als % FPR (False Positive Rate) en de cut-off om CXCR4-gebruik te bevestigen of uit te sluiten wordt op 10 % gezet: FPR ≤ 10 % = CXCR4 kan gebruikt worden, maraviroc is niet aangewezen, FPR > 10 % = enkel CCR5 wordt gebruikt, maraviroc kan opgestart worden.

Viraal RNA geëxtraheerd uit plasma en viraal DNA geëxtraheerd uit cellen kunnen beide worden gebruikt als input materiaal voor de tropisme-bepaling. Er wordt de voorkeur aan gegeven om viraal RNA uit plasma te gebruiken maar indien de persoon op therapie staat en er een switch naar maraviroc overwogen wordt dan kan de analyse gebeuren op een buffy coat staal.

Biologische referentie intervallen: Niet van toepassing.

Termijn voor resultaat (TAT):

Resultaten van de tropisme-bepaling zijn beschikbaar binnen de 15 werkdagen.

Aanvraag

Instructies voor aanvragen

Gegevens die minimaal moeten ingevuld zijn op het aanvraagformulier:

• Persoonsidentificatie (initialen, geboortedatum, geslacht, 
   rijksregisternummer)
• Identificatie van de aanvragende arts of laboratorium
   (naam, voornaam, identificatienummer en adres)
• Type staal
• Datum en bij voorkeur ook de tijd van afname
• Klinische inlichtingen nuttig voor het uitvoeren van analysen 
   en voor het interpreteren van de resultaten
• Gewenste analyse
• Datum en handtekening van de aanvragende arts/klinisch bioloog

Specifieke gegevens voor tropisme:

• Laboratorium waar de confirmatietesten werden uitgevoerd
   (indien de patiënt nog niet gekend is in ARL Gent)
• Gegevens betreffende antiretrovirale therapie 
   (samenstelling van laatste ART, startdatum ART en 
    eventuele wijzigingen in ART)
• Resultaat en datum van de laatste CD4 bepaling

Bij de staalafname is het belangrijk om de identiteit van de persoon te verifiëren en de bloedafnamebuisjes uniek te identificeren.

Het aanvraagformulier van de test kunt u terugvinden bij "Downloads", rechts bovenaan op deze pagina.

Staalafname en transport

Staalafname tropisme test

  • Men hoeft niet aan bepaalde voorwaarden te voldoen voor de bloedafname
  • Collecteer minimaal 9 ml EDTA bloed (paars)
  • Meng het staal goed na afname
  • Bewaar en transporteer het staal op kamertemperatuur
  • Het staal moet binnen de dag na afname op het ARL toekomen, af te leveren op werkdagen (ma-vr) vóór 16u30*

      * In geval bovenstaand niet mogelijk is, zie onderstaande instructies voor het
        verwerken van bloed in eigen laboratorium

Instructies voor het verwerken van bloed in eigen laboratorium

Indien de virale lading:

  • > 500 kopijen/ml: enkel plasma
  • tussen 200 en 500 kopijen/ml: zowel plasma als buffy coat
  • < 200 kopijen/ml: enkel buffy coat

Isolatie van plasma

  • Deze procedure moet uitgevoerd worden binnen de dag na bloedafname en met gebruik van steriel materiaal
  • Centrifugeer het EDTA-bloed (paars) 10 minuten bij 1900 x g bij kamertemperatuur
  • Verdeel het plasma (3-5 ml) over twee tubes (screwcap tubes, 2.0 ml of 1.7 ml)
  • Vries de tubes zo snel mogelijk in bij -20 °C
  • Transporteer de tubes diepgevroren (met droog ijs of koelelementen) naar het ARL
  • Het ontdooien van stalen tijdens het transport moet vermeden worden

Isolatie van buffy coat

  • Volg de instructies hierboven voor het verwijderen en aliquoteren van het plasma
  • Breng daarna de buffy coat cellen over in een propere tube (screwcap tube 1.7 of 2.0 ml)
  • Vries de tube zo snel mogelijk in bij -20 °C
  • Transporteer de tubes in gevroren toestand (met droog ijs of koelelementen) naar het ARL
  • Het ontdooien van stalen tijdens het transport moet vermeden worden

Richtlijnen transport

1. Zorg ervoor dat de buisjes met het staal goed sluiten om lekken te voorkomen
    Gebruik bij voorkeur buisjes met een schroefkap
    Eventueel dopje en buis met parafilm omwikkelen

2. Het staal in een transportblister of koker verpakken met vochtabsorberend
    materiaal

3. Het plaatsen in een beschermende envelop of doosje plaatsen.

4. Een UN3373 sticker en de vermelding ‘Biological Substances Category B’
    op de verpakking aanbrengen

5. Duidelijk adresseren en de stalen zo snel mogelijk naar het laboratorium 
    versturen:

Aids Referentie Laboratorium (ARL) - Universiteit Gent
Vakgroep Diagnostische Wetenschappen (GE32)
MRB2 – Ingang 38
Corneel Heymanslaan 10
9000 Gent

Aarzel niet om ons te contacteren (09/332 36 46) indien U verdere vragen of opmerkingen hebt omtrent het staaltransport.

 

Downloads

Aanvraagformulier
Formulaire de demande