HIV-1 virale lading
Specificaties van de testen
- De Cobas 5800 HIV-1 test
Alle stalen en controles worden gelijktijdig geëxtraheerd met behulp van magnetische silica beads. Hierna volgt de amplificatie van het HIV-1 GAG gen en de HIV-1 LTR regio samen met de interne standaard (RNA-QS) die bij elk staal mee geëxtraheerd wordt. De detectie wordt mogelijk gemaakt door 2 dubbel fluorescent gelabelde probes voor de HIV-1 target genen en 1 probe voor RNA-QS. De probe heeft geen fluorescentie in zijn ruststadium. Tijdens de reactie worden de probes gesplitst door de exonuclease activiteit van het DNA polymerase, waardoor de dye en de quencher vrijkomen en het fluorescent signaal kan gemeten worden.
GEVOELIGHEID / SPECIFICITEIT
De detectielimiet van de Cobas 5800 HIV-1 test is 20 kopijen/ml plasma (1,30 log).
Het verschil tussen het resultaat van twee onafhankelijke bepalingen op eenzelfde staal kan oplopen tot 0,3 log en zelfs groter zijn bij lage (< 1.000 kopijen/ml) en hoge (> 50.000 kopijen/ml) virale ladingen. Dit is een normale fout op de test en deze waarde wordt vermeld in de bijsluiter van de firma en blijkt ook uit de resultaten van eigen metingen van de interne run controle.
Dit heeft voor gevolg dat verschillen in virale lading slechts als klinisch significant mogen aanzien worden vanaf een absoluut verschil van 0,5 log.
De test is enkel geschikt voor de bepaling van HIV-1.
Biologische referentie intervallen en klinische beslissingsgrenzen:
• < 20 kopijen/ml: Limit of Quantification (LoQ)
• 20 tot 1.000 kopijen/ml: matig verhoogd
• > 1.000 kopijen/ml: verhoogd
Verdunningen zijn niet aan te raden, maar mogelijk tot maximaal een factor 1/10.
De virale lading wordt enkel uitgevoerd bij personen met een gekende HIV infectie. Indien we een aanvraag voor een virale lading bepaling ontvangen voor een persoon die bij ons nog niet geconfirmeerd is, worden eerst de confirmatie testen uitgevoerd.
TERMIJN VOOR RESULTAAT (TAT):
5 werkdagen
Instructies voor aanvragen
Gegevens die minimaal moeten ingevuld zijn op het aanvraagformulier:
• Persoonsidentificatie (initialen, geboortedatum, geslacht, rijksregisternummer)
• Identificatie van de aanvragende arts of laboratorium (naam, voornaam, identificatienummer en adres)
• Type staal
• Datum en bij voorkeur ook de tijd van afname
• Klinische inlichtingen nuttig voor het uitvoeren van analysen en voor het interpreteren van de resultaten
• Gewenste analyse
• Datum en handtekening van de aanvragende arts/klinisch bioloog
Specifieke gegevens voor Virale Lading:
• Laboratorium waar de confirmatietesten werden uitgevoerd (indien de persoon nog niet gekend is in ARL Gent)
• Gegevens betreffende antiretrovirale therapie (samenstelling van laatste ART, startdatum ART en eventuele wijzigingen in ART)
• Resultaat en datum van de laatste CD4 bepaling
Bij de staalafname is het belangrijk om de identiteit van de persoon te verifiëren en de bloedafnamebuisjes uniek te identificeren.
Het aanvraagformulier van de test kunt u terugvinden bij "Downloads", rechts bovenaan op deze pagina.
Staalafname virale lading
- Mensen hoeven niet aan bepaalde voorwaarden te voldoen voor de bloedafname
- Collecteer minimaal 9 ml EDTA bloed (paars)
- Meng het staal goed na afname
- Bewaar en transporteer het staal op kamertemperatuur
- Het staal moet binnen de dag na afname op het ARL toekomen, af te leveren op werkdagen (ma-vr) vóór 16u30*
* In geval bovenstaand niet mogelijk is, zie onderstaande instructies voor het
verwerken van bloed in eigen laboratorium
Instructies voor het verwerken van bloed in eigen laboratorium
Isolatie van plasma
- Deze procedure moet uitgevoerd worden binnen de dag na bloedafname met gebruik van steriel materiaal
- Centrifugeer het EDTA-bloed (paars) 10 minuten bij 1900 x g bij kamertemperatuur
- Verdeel het plasma (3-5 ml) over twee tubes (screwcap tubes, 2.0 ml of 1.7 ml)
- Vries de tubes zo snel mogelijk in bij -20 °C
- Transporteer de tubes diepgevroren (met droog ijs of koelelementen) naar het ARL
- Het ontdooien van stalen tijdens het transport moet vermeden worden
Richtlijnen transport
1. Zorg ervoor dat de buisjes met het staal goed sluiten om lekken te voorkomen
Gebruik bij voorkeur buisjes met een schroefkap
Eventueel dopje en buis met parafilm omwikkelen
2. Het staal in een transportblister of koker verpakken met vochtabsorberend
materiaal
3. Het geheel in een beschermende envelop of doosje plaatsen.
4. Een UN3373 sticker en de vermelding ‘Biological Substances Category B’
op de verpakking aanbrengen
5. Duidelijk adresseren (*) en de stalen zo snel mogelijk naar het laboratorium
versturen
(*) AIDS REFERENTIELABORATORIUM (ARL)
Vakgroep Diagnostische Wetenschappen (GE32)
MRB2 – Ingang 38
Corneel Heymanslaan 10
9000 Gent
Aarzel niet om ons te contacteren (09/332 36 46) indien U verdere vragen of opmerkingen hebt omtrent de staalafname of -transport.