HIV confirmatie

De SPR tip is opgedeeld in 2 delen: het bovenste deel van de binnenwand van de SPR tip is gecoat met monoclonaal anti-p24 antilichamen (voor de detectie van p24 antigen), terwijl het onderste deel gecoat is met HIV1 gp160 eiwitten en HIV1 groep O en HIV2 specifieke synthetische peptiden (voor de detectie van HIV1 en of 2 antilichamen).
Eerst vormt p24 Ag aanwezig in het staal een sandwich met het anti-p24 gecoat aan de SPR wand en met het enzymatisch gelabeld anti p24 in het reagens in de test strip. In een tweede stap binden de antigenen gecoat op het onderste deel van de SPR tip met de antilichamen in het staal en met enzymatisch gelabelde peptide in het reagens in de test strip.

In de reagens strip is tevens een optische kuvet aanwezig met daarin het substraat 4 MUP. Het enzyme gebonden aan de binnenwand van de SPR tip zet 4MUP om in Umbelliferon. Eerst wordt het onderste deel van de tip in contact gebracht met 4MUP. De gemeten fluorescentie is evenredig met de hoeveelheid antilichamen aanwezig in het staal. Vervolgens wordt het bovenste deel in contact gebracht met het substraat. Hier is de fluorescentie in verhouding met de hoeveelheid p24Ag aanwezig in het staal.

Gevoeligheid / Specificiteit

Grenswaarden voor resultaat:
< 1,00 voor Ag EN Ab: negatief
≥ 1,00 voor Ag EN/OF Ab: HIV-reactief

Termijn voor resultaat (TAT):

5 werkdagen na staalontvangst op het ARL
 

Op een nylon strip zijn volgende controlelijnen en eiwitten aangebracht:
• Controlelijnen:
    - Streptavidin controle: negatief of < level +/-
    - Sterk positieve controle (level 3+): anti- humane immunoglobuline
    - Cut-off lijnen level 1+ en level +/-: humaan IgG
• Recombinante eiwitten die specifieke antilichamen detecteren tegen:
    - HIV -1 : sgp 120 en gp 41
                   : p31, p24 en p17
    - HIV-1- subtype 0 : sgp 120
    - HIV-2 : gp 36 en sgp 105

In een samen met de kit geleverd plastic houdertje wordt verdunningsbuffer gebracht. Hierin wordt staal gepipetteerd en een nylon strip gelegd. De specifieke antilichamen in het staal binden zich tijdens de 1ste incubatieperiode op de gecoate HIV-antigenen. Tijdens een wasprocedure worden de ongebonden componenten weggewassen. Een conjugaat, bestaande uit anti-humaan IgG gekoppeld aan alkalische fosfatase, bindt zich tijdens de 2de incubatieperiode met elk gevormd antigeen/antilichaam complex op de strip. Na een 2de wasprocedure wordt een substraat/chromogeenoplossing toegevoegd. Gedurende de 3de incubatie verschijnt, op de plaats waar het specifieke antigen werd gemerkt, een donkerblauw bandje (de kleurintensiteit is evenredig met de hoeveelheid specifiek antilichaam in het staal). De reactie wordt gestopt door toevoeging van zwavelzuur.

Gevoeligheid / Specificiteit

De INNO-LIA HIV I/II score test heeft een specificiteit van 95% en is geschikt voor de detectie van zowel HIV-1 als HIV-2.
In de fase van vroege seroconversie heeft deze test een lagere gevoeligheid dan de andere gebruikte screeningstesten. Daarom wordt steeds de combinatie gemaakt van de beschikbare testen.

Termijn voor resultaat (TAT):

5 werkdagen na staalontvangst op het ARL

Meer info betreffende deze test is terug te vinden op de website van Fujirebio.